文章摘要:【背景】羟基萘还原酶（hydroxynaphthalene reductase，HNR）是1，8-间苯二酚（1，8-dihydroxynaphthalene，DHN）黑色素合成途径中起关键作用的酶，研究表明HNR不仅参与真菌黑色素合成，而且对其生长发育及致病性也具有一定的调控作用，但HNR对真菌病原物侵染结构分化的调控研究鲜见报道。【目的】在对梨果黑斑病菌（Alternaria alternata） HNR的基因进行克隆与生物信息学分析的基础上，通过药理学方法初步探讨HNR对A. alternata生长及侵染结构分化的调控作用，为进一步揭示HNR在A. alternata侵染结构分化形成过程中的分子机制提供理论依据。【方法】本文对梨果黑斑病菌A. alternata两个hnr基因进行了克隆；通过Genestructure，Open ReadingFrame，Conserved Domain等数据库和相关软件，对hnr基因及蛋白进行生物信息学分析，并利用HNR特异性抑制剂三环唑处理分析其对A. alternata生长发育、黑色素合成和侵染结构形成的影响，同时采用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）技术分析了hnr基因在A. alternata不同侵染结构分化时期的表达特性。【结果】从梨果黑斑病菌A. alternata克隆得到2个羟基萘还原酶基因HNR的CDS区全长，分别命名为Aa4hnr和Aa3hnr，其中Aa4hnr基因全长为1 266 bp，编码了268个氨基酸，无内含子，有9个ORF；Aa3hnr基因全长为1 356 bp，编码了267个氨基酸，含有2个大小分别为51 bp和49 bp的内含子，有17个ORF；进化分析表明，Aa4hnr和Aa3hnr与Ophiobolus disseminans和Alternaria arborescens分别具有较高的一致性，同时Aa4hnr和Aa3hnr编码的蛋白均含有NAD（P）结合域，属于短链脱氢酶/还原酶（ short-chain dehydrogenase/reductase，SDRs）家族。药理学结果表明，三环唑处理显著降低了A. alternata DHN黑色素的生物合成，抑制了疏水性诱导的A. alternata侵染结构的形成；进一步分析Aa4hnr和Aa3hnr在疏水表面诱导的A. alternata孢子萌发阶段（2 h）、附着胞形成阶段（6 h）、侵染菌丝（8 h）形成阶段的基因表达量，Aa4hnr的基因表达量在A. alternata侵染结构分化的各个时期均发生下调，Aa3hnr在附着胞形成时期（6 h）表达量下调，然而在侵染菌丝形成阶段（8 h）显著上调表达。【结论】Aa4hnr和Aa3hnr对梨果黑斑病菌A. alternata侵染具有一定的调控作用。

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论文DOI:10.13344/j.microbiol.china.211047

论文分类号:S436.612.14